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血痕的检验
[ 作者:本站编辑    转贴自:    点击数:7773    更新时间:2011/9/30    文章录入:本站整理 ]
 
一、血痕检验的任务
1.现场发现和提取的可疑斑迹是否是血痕。
2.确定血痕是人血还是动物血。
3.确定是人血后,需进一步确定血痕是何人的血,即通过血型测定或DNA分析,进行个人识别。
 
二、血痕检验的程序
1.肉眼观察:主要观察血痕附着的部位、颜色、形状、范围、出血量的多少及与周围物体的位置关系等,并进行记录和拍照。
(1)血痕的颜色:新鲜血呈暗红色,有光泽,随着时间的推移颜色逐渐变暗呈褐色、暗褐色、灰褐色。血痕被细菌污染可变成污绿色,真菌污染可变成灰白色。根据血痕的颜色可大致推测发案时间。
(2)血痕的形状
·滴落状血痕:血液从高处落下时形成滴落状血痕。垂直落下血滴形成圆形血痕,血痕的边缘可呈锯齿状,或四周有溅出的血点。受伤后行走过程中落下的血痕可形成一边呈锯齿状的类圆形血痕,锯齿状方向为行走的方向。
·喷溅状血痕:动脉断裂喷射出血液在墙壁等物体表面形成的大小相似、方向一致的均匀密集的线状或惊叹号状血痕称喷溅状血痕。
·流注状血痕:血液从身体高处向低处流动时形成的上淡下浓的血痕称为流注状血痕。根据尸体上的流注状血痕可以推测受伤时的体位。一般为静脉出血。
·擦拭状血痕:血液被擦拭后在相应的载体上形成的血痕称为擦拭状血痕。擦拭状血痕可以帮助判断凶器的形状。
·血印痕:沾染血液的手、凶器或踩踏血的鞋或脚,在现场留下的相应印痕的血迹。凶器柄上的血手印,地面上的血鞋印等。血印痕对于认定嫌疑凶器,侦缉罪犯等有一定的价值。
·血泊:出血量多而集中可形成血泊。血泊多位于尸体下方、周围或伤后不能活动处。根据血泊的大小、厚度估计出血量,有助于伤情或死因的分析。
 
2.预试验
(1)目的
·简单而灵敏
·筛除不是血痕的检材
(2)基本原理
·血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化物酶活性,能使过氧化氢释放出新生态氧,将无色的化学物质氧化成有色物质,发生颜色反应为阳性结果,不发生颜色反应为阴性结果。
预试验均为非特异性试验。
·其他一些液体中也含有过氧化物酶或具有过氧化物酶活性,可使血痕预试验呈阳性反应,阳性结果只表明可能是血,但不能确证是血;阴性结果可否定是血。
(3)四甲基联苯胺试验
·原理:血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化物酶活性,能使过氧化氢释放出新生态氧,将无色的四甲基联苯胺氧化成四甲基联苯胺蓝。灵敏度极高,稀释20-50万倍的血液仍可呈阳性结果。
·操作:在擦拭斑迹的滤纸上依次滴加冰醋酸、四甲基联苯胺无水乙醇饱和溶液,1-2分钟后无蓝色反应(高锰酸钾、重铬酸钾、铁锈、铜盐等),再加3%过氧化氢,立即出现翠蓝色为阳性。
·结果
-阴性结果:一般可以否定是血或血已完全被破坏
-阳性结果:说明斑迹可能是血
(4)酚酞试验
·原理:血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化物酶活性,能使过氧化氢释放出新生态氧,将无色的还原酚酞氧化为酚酞,在碱性溶液中成红色。
·方法:取微量检材与白瓷板上,加无色还原酚酞,半分钟后无红色反应,再加3%过氧化氢,立即出现红色为阳性反应。
 
3.确证试验
(1)基本原理:血色原是血红蛋白的一种衍生物,在碱性条件下血红蛋白分解成正铁血红素和变性珠蛋白,正铁血红素在还原剂的作用下被还原成血红素,血红素与含氮的化合物(如变性珠蛋白、吡啶等)生成血色原结晶。血色原结晶为针状、菊花状的樱桃红色的结晶。
(2)方法:剪取或刮取少量检材于载玻片上,将血痂压碎或用针分离布纤维,加1滴高山试剂,盖上盖玻片,镜检,若出现橙红色或菊花状结晶为阳性反应。
(3)意义:确证实验灵敏度较低,血液稀释200倍便难以形成典型的结晶。经雨淋、水洗、细菌污染等条件差的血痕常显示为阴性结果。高山试剂久置失效,每次试验时应用对照学很测试试剂,避免因试剂失效产生假阳性结果。在实际鉴定中,不管此项试验结果如何,都应当继续下一步的实验以确定血痕的存在。近年来确证试验在实际应用中使用的较少。
 
4.种属试验
(1)目的:确定血痕是人血还是动物血。
(2)方法:免疫学方法,如沉淀反应试验、酶联免疫吸附试验;生物化学方法,如电泳法。
(3)原理:可溶性抗原与抗体结合,产生肉眼可见的沉淀物称为沉淀反应。利用抗人血清和检材浸出液反应,如果产生肉眼可见的白色沉淀物为阳性反应,证明血痕是人血;不出现白色沉淀物为阴性结果,表明血痕不是人血或是动物血。
 
5.血型检验
(1)血型的概念:血型是指各种血液成分的遗传标记。
·血型包括红细胞血型、白细胞血型、血小板血型、血清型和酶型。
·血型物质又称血型抗原,例如,A、B、O血型的血型物质是指红细胞及其他组织细胞表面的A、B、H血型抗原。
·血型系统:同源染色体上同一位点不同等位基因决定的血型的总和。
·应用免疫学或生物化学方法测定的血型称为表现型或表型。
(2)血型同一认定的理论依据
·特定性:据粗略计算,红细胞血型表型可能有10亿种以上,白细胞血型至少有四亿种以上,两者合计达4×107中,已远远超过地球人口的总数,这还没有考虑酶型和血清型等,因此,除同卵双生子外,世界上没有两个所有血型完全相同的个体。
·稳定性:血型具有受遗传控制和终生不变的特点
·反映性:血型可以通过实验的方法检验。
(3)解离试验
·解离试验的原理:抗原与抗体的结合是可逆的,在56℃抗原抗体复合物可发生解离,释放出抗体。血痕中的A或B抗原与相应的抗A或抗B血清抗体结合,在除去未结合的抗体后,在56℃的条件下,解离下来的抗体可以与相应的指示红细胞发生凝集。根据有无凝集反应发生可判断血痕中存在何种抗原,是何种血型。
·解离试验的方法
-吸附:将3%的蛋清生理盐水滴于载玻片两侧各1滴,并立即吸除,留下蛋清液痕迹,将微量血痕检材黏附于蛋清液上。干燥后,加一滴甲醇固定,待甲醇挥发后,分别加已知的抗A和抗B血清,未知血型抗原与相应抗体发生特异性结合的过程称为吸附;
-洗涤:用自来水洗去多余的或未发生特异性结合的抗体,称为洗涤;
-解离:在56℃下解离10分钟;
-镜检:加入指示红细胞,在显微镜下观察,有红细胞凝集为阳性,说明血痕中含有相应的血型抗原。
-读取结果:试验时要以检材无血痕 部位作为阴性对照,已知A、B、O型血作阳性对照。
(4)酶型的测定
·概念:酶是体内具有催化活性的蛋白质,它广泛存在于人体血液、组织、细胞和其他体液中。在遗传学上,把同一种酶在不同的个体间存在遗传变异的现象称为多态性,在生物学上称为同工酶。能催化相同的生物化学反应,而分子结构、组成都不同的一组酶称为同工酶。
·酶型测定的方法——电泳:
-电泳是指带电粒子在电场中移动的现象。
-蛋白质是由氨基酸组成的。氨基酸是两性电解质,一端带有氨基(nH4+),另一端带有羧基(COOH-)。不同种类的蛋白质的氨基酸组成不同,因此蛋白质分子的大小、形状、所带电荷不同。
-根据酶分子的大小和所带净电荷的不同,在电荷作用下的迁移速度不同而被分离;经特异性染色技术,显示出相应的酶谱带即电泳行为。
·常见的同工酶:
-酸性磷酸酶(ACP):遍及人体全身组织。常染色体显性遗传。
-6—磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)
-葡萄糖磷酸变位酶(PGM1):糖代谢中起重要作用的同工酶。它存在于人体几乎所有的组织中。具有高度遗传多态性,属常染色体显性遗传。
-酯酶D(ESD)
-乙二醛酶(GLO)
(5)血清型的检验:血清型是指人类血清中的很多蛋白质,具有遗传多态性,可以分型,称为血清型。结合珠蛋白(HP)、转铁蛋白(Tf)、维生素结合蛋白(Gc)、补体成分(C2、C3、C6等)、免疫球蛋白(Gm、Am、Em、Km)、抗胰蛋白酶(Pi)等。
(6)白细胞血型的检验:白细胞血型主要是指人类白细胞抗原(HLA)系统。HLA又称组织相容性抗原。HLA是迄今发现的最复杂的人类遗传标记。HLA的基因位于第6号染色体紧密连锁(不同位点同时遗传)的基因座位上,分别为A、B、C、D、DR、DP、DQ系统。HLA系统具有高度多态性,其表型有几亿种之多,在随机人群中HLA分型完全相同的可能性很小。在亲子鉴定中,HLA不仅可以排除亲子关系,还可以肯定亲子关系。
(7)DNA分型:必要时要进行性别检验、出血部位和出血时间的鉴别。
6.如何运用血型的遗传推断亲子关系
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